日本沼虾养殖过程中氨基脲存在特征研究

为探究不同生长时期养殖日本沼虾(Macrobrachium nipponense)体内氨基脲(Semicarbazide,SEM)的存在特征与变化规律,从养殖池塘采集不同生长时期日本沼虾样品,对各组织中SEM含量进行测定。结果表明:不同生长阶段日本沼虾样品中均有SEM检出,肌肉、甲壳、附肢、眼柄、鳃、肝胰腺中总SEM含量分别为(6.88±0.15)^17.11±0.62、(107.30±1.10)^306.09±8.69、(243.90±8.55)^{532.31±26.27}、(85.27±3.19)^122.82±2.60、(48.43±2.13)^85.60±1.33、(13.51±1.15)^25.94±1.78μg/kg,呈现:附肢>甲壳>眼柄>鳃>肝胰腺>肌肉的含量分布特征。SEM在肌肉和肝胰腺中主要以游离态形式存在,游离态SEM所占平均比例分别为67.35%和72.4%,在甲壳、眼柄、附肢、头胸部和鳃中主要以结合态形式存在,结合态SEM所占平均比例分别为89.50%、87.16%、85.68%、80.48%和73.30%。随着养殖过程进行,肌肉中总SEM含量总体逐渐降低,甲壳和附肢中总SEM含量呈现总体上升的变化趋势。研究结果可为甲壳类水产品中SEM残留限量标准的修订和采样技术规范的制订提供基础数据。     

青虾种质资源研究与保护进展

为了有效开展长江中下游地区青虾规模化养殖等工作。本研究简要总结青虾基础生物学、生化组成、细胞遗传学、生化遗传学、分子遗传学及基因组学等方面的主要研究成果,并对青虾种质资源的保护利用提出了一些意见。旨在为青虾种质资源的合理利用和保护提参考资料。     

青虾血蓝蛋白基因的克隆、表达分析及多克隆抗体的制备

应用RACE技术克隆了青虾(Macrobrachium nipponense)的Hc基因全长cDNA序列, 并对该基因序列特征进行了分析。青虾Hc基因cDNA全长2 235 bp, 包括10 bp的5′末端非翻译区(UTR), 2 074 bp的开放阅读框(ORF), 151 bp的3′UTR, 开放阅读框编码688个氨基酸。蛋白相似度比对显示, 青虾血蓝蛋白含有典型的6个保守的铜离子结合位点。系统进化树分析表明, 青虾Hc与脊尾白虾(Exopalaemon carinicauda) Hc聚在一起, 具有最近的亲缘关系。荧光定量PCR检测显示, Hc基因在青虾不同组织中均有表达, 其表达量在肝胰腺中最高; 使用荧光定量PCR检测青虾Hc基因在低氧胁迫和复氧条件下在肝胰腺中的mRNA时空表达情况, 结果显示, 经低氧和复氧刺激后, 与对照组相比, Hc 在肝胰腺中的表达量分别在低氧胁迫 12 h、24 h 和复氧6 h出现了3次明显上调, 由此推测Hc基因参与低氧应激分子过程。此外, 本研究通过血蓝蛋白的分离纯化技术制备了多克隆抗体, 本研究结果可为更进一步的了解青虾血蓝蛋白的生理功能提供理论支撑。

     

日本沼虾过氧化物还原酶基因的克隆及其表达分析

利用cDNA末端快速克隆方法获得了青虾(Macrobrachium nipponense)的过氧化物还原酶基因(Prx)全长cDNA序列。该基因cDNA全长878 bp, 包括72 bp的5′末端非翻译区, 594 bp的开放阅读框(ORF), 212 bp的3′末端非翻译区, 开放阅读框编码198个氨基酸。氨基酸相似度比对显示, 所分离的青虾过氧化物还原酶基因包括两个半胱氨酸残基的区域“FYPLDFTFVCPTEI”和“GEVCPA”。系统进化树分析表明, 青虾过氧化物还原酶基因与南美白对虾(Litopenaeus vannamei)过氧化物还原酶聚在一起, 具有最近的亲缘关系。荧光定量PCR检测显示, 过氧化物还原酶基因在青虾不同组织中均有表达, 其表达量由低到高依次为肠道、心脏、卵巢、肌肉、鳃、肝胰腺。使用荧光定量PCR检测青虾在低氧胁迫和复氧条件下肝胰腺中的过氧化物还原酶基因mRNA的时空表达情况, 结果显示, 与对照组相比, 实验组青虾过氧化物还原酶在肝胰腺和鳃组织中的表达量分别在低氧胁迫12~24 h 和复氧6 h出现了3次明显上调, 由此推测过氧化物还原酶基因参与低氧应激分子过程。本研究结果可为进一步了解青虾低氧应激分子机制提供参考。

     

杂交青虾“太湖1号”与日本沼虾养殖性能的比较

试验以肥满度、平均规格、饲料系数、生长速度等生长性能指标,pH值、溶解氧、氨态氮、亚硝态氮等水质指标为依据,比较"太湖1号"F1及F2代与日本沼虾的生长性能。结果显示,饲料系数从低到高依次为:"太湖1号"F1<日本沼虾<"太湖1号"F2,其中F1和F2差异显著(P<0.05)。平均规格及上市成虾比例从高到低依次为:"太湖1号"F1>"太湖1号"F2>日本沼虾,其中F1代显著高于日本沼虾(P<0.05)。"太湖1号"的肥满度与日本沼虾差异不明显。9—10月吃食旺盛季节,杂交青虾"太湖1号"的体质量与体长均高于日本沼虾,其中,F1代达到显著水平(P<0.05),但体质量与体长的瞬时增长率优势不明显。9—10月份"太湖1号"F1养殖池的氨态氮、亚硝态氮等水质指标显著低于F2和日本沼虾池,而溶解氧与pH值的差异不大。养殖效益分析表明,尽管杂交青虾的增产优势不明显,但因其规格大,销售价格高,其产值与净利润仍高于日本沼虾,且F1代达到显著水平(P<0.05)。所以,杂交青虾"太湖1号"F1代的养殖性能显著优于日本沼虾,但F2代的生长优势不明显。     

应用SSR和SRAP标记构建青虾遗传连锁图谱

采用SSR和SRAP标记结合拟测交策略构建青虾(Macrobrachium nipponense)遗传连锁图谱。共有175个标记(含27个SSR、148个SRAP标记)分布在53个连锁群上。每个连锁群含2~8个标记,其中不少于3个标记的连锁群有35个,连锁对18个,平均每个连锁群的标记数为3.3个;连锁群长度在6.7~91.2 cM之间,相邻标记间最大间隔为49.0 cM,最小为1.4 cM,平均间隔为13.1 cM。青虾框架图谱长度为997.2 cM,图谱观察总长度为2 270.5cM,根据估算,青虾遗传连锁图谱预期长度为4 380.6 cM,图谱的覆盖率为51.83%。本研究构建了青虾遗传连锁图谱,该图谱也是淡水虾蟹类第一张遗传连锁图谱,可为青虾QTL定位、基因克隆、遗传选育等提供指导,并为进一步构建高密度的青虾遗传连锁图谱奠定了基础。     

植酸酶对日本沼虾生长、体组成和消化酶的影响

在水温27±2.0℃的条件下,对体质量为0.199±0.089 g的日本沼虾进行了56 d的室内水循环系统饲养试验,探讨了添加植酸酶对日本沼虾生长、体组成和消化酶的影响。试验设7个组,其中试验组1-6分别在基础日粮中分别添加0、250、500、1 000、1 500和2 000 U/kg的植酸酶,试验组7不加植酸酶,加1.2%的磷酸二氢钙。每个试验组设3个重复。结果表明：添加植酸酶对日本沼虾成活率没有显著影响;WGR和SGR以添加500 U/kg植酸酶的试验组显著高于正对照组（P〈0.05）;植酸酶添加各组与对照组虾体的水分、粗蛋白、粗脂肪、粗灰分和总磷含量差异不显著;与正对照组相比,日本沼虾肝胰脏蛋白酶、脂肪酶活性提高显著（P〈0.05）。结果说明,在特定试验条件下,饲料中添加植酸酶对日本沼虾的WGR、SGR有显著影响（P〈0.05）,对日本沼虾体组成影响不显著（P〉0.05）。     

2种方法提取日本沼虾基因组DNA

以日本沼虾的尾部肌肉为材料,采用苯酚-氯仿法和氯化钠法提取日本沼虾基因组DNA,并对2种方法提取的结果进行了紫外分光光度、琼脂糖凝胶电泳、PCR扩增等方法的鉴定。结果表明:2种方法提取的日本沼虾基因组DNA浓度分别为3 165.8和396.5ng/μl,OD260/OD280比值分别为1.76和1.63,均能满足分子生物学研究的需要。     

镨对青虾卵子孵化的影响

研究了镨(Pr)对青虾（Macrobrachiumnipponense）卵子孵化出Sou状幼体的影响，结果表明：Pr^3 的最佳质量浓度为0.4-1.6mg/L，可孵化离12.4%-20.3%。青虾卵子对Pr^3的饱和吸收量为9.2μg／粒，饱和吸收率为36.8%。     

沼虾、河蟹对栖息隐蔽物的选择性

以日本沼虾（Ｍａｃｒｏｂｒａｃｈｉｕｍｎｉｐｐｏｎｅｎｓｅ）、罗氏沼虾（Ｍａｃｒｏｂｒａｃｈｉｕｍｒｏｓｅｎｂｅｒｇｉｉ）和中华绒螯蟹（Ｅｒｉｏｃｈｅｉｒｓｉｎｅｎｓｉｓ）为实验对象，在水族箱内设置不同颜色、不同质地、不同形状的多种栖息隐蔽物（真假水草、网片、人工巢穴、蚌壳、细竹技、塑料管、礁石等），于一定时间内观察统计虾蟹的攀附率。实验显示，沼虾对颜色的选择无明显的倾向性，真假水草上或其他生物性和非生物性栖息隐蔽物上的攀附率也没有明显差异；而在多种水生植物的比较中，以凤眼莲和水蕹菜上的攀附效果最好，显然与其水下根系发达有关。在非生物性的栖息隐蔽物中，多层式人工虾巢和双层水平网片的栖息隐蔽效果较好。平均攀附率与栖息隐蔽物所处的水层有关（一般以底层较中层、表层为高），而昼夜间比较无显著差异。与虾相似，幼蟹喜在浮生植物和多层式人工蟹巢中栖息隐蔽，平均攀附率亦无明显的昼夜变化。作者通过实验观察认为，采用水蕹菜等浮生植物结合设置多层式人工巢穴可充分利用立体水层，增大放养密度，提高虾（或蟹）的成活率、产量和质量。